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DENARASE?全能核酸酶——宿主核酸去除解決方案

藥典中核酸殘留限量規(guī)定

WHO和各國(guó)藥物注冊(cè)監(jiān)管機(jī)構(gòu)一般只允許生物制劑中存在100 pg/劑量以下的殘留DNA，特殊情況下不大于10ng/劑量。根據(jù)雜質(zhì)來(lái)源和純化工藝的不同，一般酵母、大腸桿菌表達(dá)的生物制品中DNA殘留量不超過(guò)10ng/劑量，Vero和MDCK細(xì)胞表達(dá)的疫苗等生物制品中DNA殘留量不超過(guò)100pg/劑量或10pg/劑量（根據(jù)宿主細(xì)胞和給藥方式的不同，限量要求不同）。

DENARASE® 全能核酸酶

DENARASE®全能核酸酶是一款通過(guò)微生物發(fā)酵生產(chǎn)的基因工程非限制性核酸內(nèi)切酶，其基因序列來(lái)自粘質(zhì)沙雷菌（Serratia marcescens），生產(chǎn)菌株是一種安全級(jí)別為S1級(jí)且不含內(nèi)毒素的革蘭氏陽(yáng)性芽孢桿菌（Bacillus.sp.），大大降低了內(nèi)毒素污染風(fēng)險(xiǎn)。DENARASE®是c-LEcta GmbH公司在歐盟、美國(guó)、中國(guó)、印度、日本和韓國(guó)的注冊(cè)商標(biāo)（https://denarase.com/）。其擁有的自主專利生產(chǎn)工藝，完全采用非動(dòng)物性原料，不添加抗生素，符合歐盟GMP生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)，通過(guò)ISO9001:2015質(zhì)量體系認(rèn)證，核酸酶純度大于99%，酶活性高，且無(wú)蛋白酶活性，是生物制品生產(chǎn)工藝中常用全能核酸酶的典型代表。

DENARASE®全能核酸酶能夠降解所有形式的DNA和RNA，包括單鏈、雙鏈、線性、超螺旋和環(huán)狀DNA、RNA及基因組DNA，對(duì)核酸序列沒有特異性。在純化工藝中使用 DENARASE®全能核酸酶，可有效降低細(xì)胞裂解液粘度，改善蛋白純化工藝，高效去除重組蛋白制品核酸污染，大幅降低終產(chǎn)品污染風(fēng)險(xiǎn)，滿足法規(guī)要求，在細(xì)胞治療、病毒載體疫苗等領(lǐng)域應(yīng)用廣泛。DENARASE®全能核酸酶的DMF已經(jīng)提交，目前正處于審核階段。

核酸酶活性的影響因素分析

DENARASE®全能核酸酶在廣泛的條件下仍有很強(qiáng)的生物酶活性，跟大多數(shù)生物酶一樣，核酸酶的活性也會(huì)隨溫度、pH值、Mg2+、緩沖體系和底物濃度等因素的改變而變化。為了更好的發(fā)揮核酸酶的活性，幫助使用者更快的摸索出適宜的反應(yīng)條件，小編為各位提供一組對(duì)核酸酶活性影響較大的關(guān)鍵參數(shù)指標(biāo)供參考。（數(shù)據(jù)來(lái)源于廠家驗(yàn)證指導(dǎo)文件）

溫度	適宜反應(yīng)溫度為37℃
pH值	適宜pH值范圍是8.0-9.0之間
Mg2+	適宜Mg2+濃度范圍是1-2mM
單價(jià)陽(yáng)離子濃度	推薦Na+和K+的濃度在100mM以下
消泡乳化劑	4%的消泡乳化劑對(duì)核酸酶活性無(wú)明顯抑制作用
緩沖系統(tǒng)	高濃度的緩沖體系會(huì)抑制核酸酶的活性 Tris鹽酸緩沖體系活性大于Tris磷酸鹽緩沖體系
底物濃度	DNA底物濃度不大于1mg/mL時(shí)活性較高

1 溫度

核酸酶適宜反應(yīng)溫度為37℃。

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2 pH值

不同緩沖體系結(jié)果顯示，適宜pH值范圍在8.0-9.0之間。

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3 Mg2+

輔助因子Mg2+適宜濃度范圍是1-2mM，當(dāng)增大Mg2+濃度時(shí)，酶活性會(huì)下降。

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4 單價(jià)陽(yáng)離子濃度

單價(jià)陽(yáng)離子的存在會(huì)抑制核酸酶的活性，應(yīng)控制Na+和K+的濃度在100mM以下。

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5 消泡乳化劑

消泡乳化劑常被應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)的發(fā)酵液中，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，4%的消泡乳化劑對(duì)核酸酶活性無(wú)明顯抑制作用。

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6 緩沖系統(tǒng)

高濃度的緩沖體系會(huì)抑制核酸酶的活性，在Tris鹽酸緩沖體系中酶活性大于Tris磷酸鹽緩沖體系。隨著Tris磷酸鹽緩沖體系中磷酸鹽濃度的增加，酶活性降低，然而Mg2+離子濃度的增加會(huì)削弱其抑制作用。

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DNA1 (standard):Sigma,D1626(salmon testes)

DNA2:Promega,D181A(herring sperm)

DNA3:GE Healthcare,27456501(200-6000 bps)

DNA4:Millipore,262015

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7 底物種類及濃度

核酸酶對(duì)不同來(lái)源的DNA底物,降解的DNA片段長(zhǎng)度不同，下圖為不同來(lái)源DNA底物，濃度在1mg/mL的結(jié)果。為了保持核酸酶的高活性，DNA底物濃度應(yīng)不大于1mg/mL。

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DENARASE®全能核酸酶產(chǎn)品信息

貨號(hào)	規(guī)格	酶活	詳情
20804-1M	1 MU (1,000,000 Units)	＞250 U/μl	生產(chǎn)和灌裝全部符合EU GMP標(biāo)準(zhǔn)；適用于生物制品生產(chǎn)或有GMP要求的應(yīng)用中添加。
20804-5M	5 MU (5,000,000 Units)	＞250 U/μl
20804-100k	100 kU (100,000 Units)	＞250 U/μl	生產(chǎn)符合EU GMP標(biāo)準(zhǔn)，灌裝按照ISO 9001標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行；適用于生物制品研發(fā)或沒有GMP要求的應(yīng)用中添加。
20804-500k	500 kU (500,000 Units)	＞250 U/μl

DENARASE® 全能核酸酶重要參數(shù)

c-LEcta GmbH公司為了確保DENARASE®全能核酸酶的穩(wěn)定和高質(zhì)量水平，每個(gè)批次試劑均滿足以下參數(shù)的內(nèi)部驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)。

酶活: >250 U/μL

純度: ≥99%

比活度：＞6*105 U/mg

蛋白酶活性：無(wú)

內(nèi)毒素：＜0.25EU/kU

總菌落數(shù)：＜250cfu/200μL

免費(fèi)試用進(jìn)行中

關(guān)注西美杰微信公眾號(hào)（微信號(hào)：xmjsci），回復(fù)“核酸酶試用”，填寫表單即可申請(qǐng)c-LEcta DENARASE® 核酸酶免費(fèi)試用機(jī)會(huì)，數(shù)量有限，先到先得！